2xLab SuperHiFi PCR Master Mix（含染料）是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，只需加入模板、引物和水即可進(jìn)行高保真PCR反應(yīng)。本產(chǎn)品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒以及粗品為模板的PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品型號(hào)：T1212

更新時(shí)間：2025-07-17

廠商性質(zhì)：代理商

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產(chǎn)品分類

分子生物學(xué)試劑

分子其他 DNA相關(guān) 內(nèi)切酶克隆相關(guān) 核酸電泳 qPCR相關(guān) 反轉(zhuǎn)錄相關(guān) PCR相關(guān) 核酸純化相關(guān)

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品牌	LABLEAD	貨號(hào)	T1212
規(guī)格	1ml	供貨周期	一周

2xLab SuperHiFi PCR Master Mix（含染料）

貨號(hào)：T1212

儲(chǔ)存條件：-20℃

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格 S	規(guī)格 M	規(guī)格 L
2× Lab SuperHF PCR Master Mix（含染料）	1 ml	5×1 ml	20×1 ml
2.5× PCR Enhancer	1 ml	1 ml	5×1 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

2xLab SuperHiFi PCR Master Mix（含染料）是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，只需加入模板、引物和水即可進(jìn)行高保真PCR反應(yīng)。本產(chǎn)品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒以及粗品為模板的PCR反應(yīng)。預(yù)混液中包含紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。預(yù)混液中的紅色染料與1500 bp 雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 保真度高，擴(kuò)增速度快：保真度是普通Taq酶的70倍，擴(kuò)增速度是Pfu的5倍。

2. 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度長(zhǎng)：使用λDNA、質(zhì)粒等簡(jiǎn)單模板時(shí)，可以輕松擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)20 kb的片段；而使用基因組DNA等復(fù)雜模板時(shí)，能有效擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)12 kb的片段。

3. 2× Lab SuperHF PCR Master Mix對(duì)PCR抑制劑具有良好的耐受能力，對(duì)粗提樣本也能進(jìn)行很好的擴(kuò)增。

反應(yīng)體系：

試劑	使用量
2× Lab SuperHF PCR Master Mix（含染料）	25 μl
2.5× PCR Enhancer（可選）	10 μl^a
上游引物 (10 μM)	1 μl
下游引物 (10 μM)	1 μl
模板	x μl
ddH2O	Up to 50 μl

模板用量：

模板種類	推薦用量
基因組DNA	10~200 ng
質(zhì)?；虿《綝NA	10 pg~50 ng
cDNA	1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)
粗品	1~5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10)

a. 當(dāng)擴(kuò)增片段 GC 含量 >60% 且優(yōu)化條件也無法正常擴(kuò)增時(shí)，推薦使用 2.5×PCR Enhancer來優(yōu)化 PCR 反應(yīng)。與無染料的2× S705 HiFi Master Mix（T1211）相比，T1212所需的PCR Enhancer更少，請(qǐng)避免加入過量Enhancer導(dǎo)致擴(kuò)增失敗程序推薦：Touchdown PCR（降落 PCR）程序。

反應(yīng)程序：

①三步法：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性^b	95^oC	3-5 min	1
變性	95^oC	10 s	30-35
退火^c	55~72^oC	15s
延伸^d	72^oC	30 s/ kb
終延伸	72^oC	5 min	1
	4-8^oC	Hold

b. 對(duì)于普通模板，預(yù)變性可縮短至30~60 s；對(duì)于復(fù)雜模板，例如高 GC 序列，推薦延長(zhǎng)預(yù)變性時(shí)間到3~5 min 以充分變性；

c. 根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置退火溫度。如引物Tm值≥72℃，可刪除退火步驟，直接進(jìn)行后續(xù)的延伸步驟(兩步法PCR)。如果需要，可以建立一個(gè)溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外，退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性。如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差，可適當(dāng)提高退火溫度;

d. 對(duì)于大多數(shù)模板，30s/kb即可有效擴(kuò)增; 對(duì)于一些復(fù)雜模板，可延長(zhǎng)延伸時(shí)間至30~60 s/kb。

②兩步法^e：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95^oC	3-5 min	1
變性	95^oC	10 s	30-35
退火&延伸	65~68^oC	30 s/ kb	30-35
終延伸	72^oC	5 min	1
	4-8^oC	Hold

e. 通常情況下使用兩步法和三步法進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，性能無顯著差異，可以根據(jù)操作習(xí)慣自行選擇。但對(duì)于一些復(fù)雜模板(如長(zhǎng)片段，Tm 分布不均勻，特殊結(jié)構(gòu)模板)，可以嘗試兩步法或者Touchdown PCR (降落PCR)法。此外，使用質(zhì)粒為模板進(jìn)行點(diǎn)突變時(shí)，也建議使用兩步法。

③Touchdown PCR（降落 PCR）^f法：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95^oC	3-5 min	1
變性	95^oC	10 s	30-40
退火	68℃ (-0.2℃/cycle)	15s
延伸	72^oC	30 s/ kb
終延伸	72^oC	5 min	1
	4-8^oC	Hold

f. 該程序僅供參考，Touchdown PCR (降落PCR)有多種程序可靈活調(diào)整，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求與習(xí)慣自行決定是否采用。

注意事項(xiàng)：

1. 請(qǐng)不要使用含尿mi啶的引物和模板。

2. Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase具有較強(qiáng)的校正活性，產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物是平末端，如果用于下一步克隆實(shí)驗(yàn)，建議使用平末端克隆。如果擴(kuò)增產(chǎn)物需要用于TA克隆，加A之前須*行DNA純化。

3. 為了提高擴(kuò)增成功率和產(chǎn)量，請(qǐng)使用高質(zhì)量的模板。

4. 請(qǐng)?jiān)O(shè)置PCR儀程序時(shí)選擇“Tube"而不是“Block"模式，部分機(jī)型兩種模式升降溫差異較大，“Block"模式可能導(dǎo)致復(fù)雜模板擴(kuò)增失敗。

上一個(gè)：T0126T7 High Yield RNA Synthesis Kit