DAB顯色試劑盒

產(chǎn)品組成

保存條件：A組分 -20℃，B、C組分4℃避光密閉保存，一年有效。避免反復(fù)凍融。

DAB顯色試劑盒

產(chǎn)品簡介：

DAB辣根過氧化物酶顯色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一種依據(jù)辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色,用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或 Western(Southern、Northern、EMSA 等膜顯色的試劑盒。DAB即 3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride，是辣根過氧化物酶的常用底物，在辣根過氧化物酶的催化下DAB會產(chǎn)生棕色沉淀，該棕色沉淀不溶于水和乙醇，因此在DAB顯色后,還可以使用溶于乙醇的染料進行后續(xù)染色。

Lablead DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒可以用于細胞或組織在免疫組化或原位雜交時結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測以及細胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。本試劑僅用于科研領(lǐng)域。

自備材料:

1、洗滌液2、蒸餾水

操作步驟(僅供參考)∶

1、常規(guī)組織切片、細胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育，用適當(dāng)洗滌液洗滌3~5次，每次3~5min ;對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細胞樣品，在適當(dāng)固定后也可用洗滌液洗滌3~5次，每次3~5min。

2、按DAB顯色液∶DAB buffer︰DAB氧化劑=5000∶5000∶3的比例混合，即為DAB顯色工作液，即配即用。

3、洗滌組織，去除洗滌液，加入適量DAB顯色工作液，確保覆蓋樣品。

4、室溫避光孵育30min 或更長時間，直至顯色至預(yù)期深淺。

5、去除DAB顯色工作液，用蒸餾水清洗1~2次即可終止顯色反應(yīng)。

6、對組織切片或細胞樣品，反應(yīng)終止后，如有必要可用中性紅染色，便于觀察；對于膜染色，反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項︰

1、本試劑盒給予的DAB氧化劑多于實際使用量，請按比例使用。

2、DAB氧化劑易揮發(fā)，請注意密閉保存，以免效率下降，一旦開封請盡快使用。

3、DAB氧化劑有腐蝕性，請勿直接接觸于人皮膚、毛發(fā)等。

4、試劑(A)、試劑(B避免反復(fù)凍融，以免顯色效率下降。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題及可能原因︰

1、背景顯色太深

①在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉;也應(yīng)注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

②在進行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，可以在4倍體積甲醇中加入1倍體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。

③可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取?/p>

④選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

2、沒有顯色或顯色太弱

①適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度﹔檢測二抗效果，滴1滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。

②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生wu素檢測體系。

③適當(dāng)延長顯色時間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。