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產(chǎn)品中心

Product Center

當前位置:首頁產(chǎn)品中心生化試劑其他生化試劑LT0201-3000ULong Taq DNA Ploymerase

Long Taq DNA Ploymerase
產(chǎn)品簡介

Long Taq DNA Ploymerase。通過改變PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR擴增條件等,使長鏈DNA的擴增成為可能,這就是LA(Long and Accurate)PCR技術。本試劑盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有矯正作用的聚合酶的混合物,這種聚合酶可以染色體和其他細胞器的DNA為模板高效進行PCR反應。

產(chǎn)品型號:LT0201-3000U
更新時間:2023-11-10
廠商性質(zhì):代理商
訪問量:288
詳細介紹在線留言
品牌LABLEAD貨號LT0201
供貨周期現(xiàn)貨

Long Taq DNA Ploymerase

貨號LT0201

儲存溫度-20。C,濃度5U/ul。


產(chǎn)品組成、濃度

目錄編號

LT0201-500U

LT0201-3000U

LongTaq DNA Ploymerase

500U

3000U

10xLongTaqBuffer

(2.5mM Mg2+ Plus)

1ml

6*1ml


產(chǎn)品介紹

一般PCR法具有一定的局限性,特別是難以擴增5kb以上的長鏈DNA,這嚴重限制了PCR法的推廣和應用。通過改變PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR擴增條件等,使長鏈DNA的擴增成為可能,這就是LA(Long and Accurate)PCR技術。本試劑盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有矯正作用的聚合酶的混合物,這種聚合酶可以染色體和其他細胞器的DNA為模板高效進行PCR反應。在人的染色體上可以擴增長度可達27kb的DNA片段,而以λDNA為模板則可擴增出高達40kb的片段。


適用范圍

一般用于DNA片段的PCR擴增、DNA標記、引物延伸、序列測定、DNA平末端加A等,產(chǎn)物可直接用于TA克隆。


建議循環(huán)條件

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)目

預變性

94C

1-2min

1

變性

94。C

10-20sec

10

退火

65。C(視引物而定)

30sec

延伸

68。C

45-60sec/kb*

變性

94。C

10-20sec

15-20

退火

65。C(視引物而定)

30sec

延伸

68。C

45-60sec/kb +1-20sec“自動延長"/循環(huán)*

最后延伸

68。C

10min

1

*擴增大片段尤其是20kb以上的片段建議15-30個循環(huán),每個循環(huán)的延伸時間要增加10-15sec“自動延伸"時間,如果PCR儀器沒有“自動延時"功能,那么設定延伸時間建議在原有基礎上增加1-4min。

PCR片段長度(kb)

延伸時間(min)

自動延長/循環(huán)(sec)

3

2

1

6

4

2

10

7

5

15

10

5

20

14

10

25

17

10

30

20

15

35

24

15

40

27

20

45

30

20

注意事項:

1.10xLong Taq Buffer pH值較高,可能會形成【Mg(OH)2】沉淀,使用蒨要充分溶解,并用Votex保證可能的沉淀重新溶解,或者37。C溫育5min,然后Votex充分混勻。

2. 擴增長片段建議使用0.2ul薄壁管。其他試管未經(jīng)測試。較厚的試管在92。C時不能有效的使模板變性。變性時,盡可能縮短變性時間,降低變性溫度。第一步變性在92。C-94。C下進行2min(GC含量高可能延長時間達5min)。再循環(huán)過程中盡可能縮短變性時間(92。C-94。C下進行10-15s),除非模板中富含GC,則95C下變性30s,這可以防止DNA脫嘌呤和鏈斷裂,對于所需擴增的基因組DNA片段中長度超過12kb時,應盡可能降低變性溫度和時間。變性需要的時間在不同PCR儀上稍有不同。

3. 如果擴增片段GC含量高或者擴增片段比較長,可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%,zui常用2%(小于30kb)或者4%(大于30kb)往往會改善擴增效果。


4. 擴增長片段,引物一般終濃度為0.3-1uM,長度最好為27-36bp;退火溫度一般在65。C-70。C,此時退火溫度和延伸溫度基本一致,可將退火延伸在一個溫度進行,使用2階段擴增法。當然如果設計的引物在20bp左右,則還是使用傳統(tǒng)3階段擴增法。

5. 模板一般使用0.01-2.5ng(λ phage)或者0.1-1ug(human)。

6. 1xLong Taq buffer中Mg2+濃度為2.5mM,建議dNTP濃度為400mM,要得到最佳結果,優(yōu)化Mg2+是必須的。如果含有較高的EDTA或螯合劑,則應該提高Mg2+;如果要增加dNTP濃度,相應的也要增加Mg2+濃度。




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