2×Lab FL PCR Master Mix

產(chǎn)品貨號(hào)：FL0201

儲(chǔ)存條件：-20°C 保存2年。短時(shí)間（1個(gè)月內(nèi)）使用可以置4°C。

產(chǎn)品說明

本產(chǎn)品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。 使用時(shí)只需加入模板、引物，并補(bǔ)足水至Mix終濃度為1×即可。本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測(cè)序等后續(xù)操作。PCR產(chǎn)物為3，端帶A頭，純化后可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA系列載體（貨號(hào)：PA0101、PA0102）克隆。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、超快的擴(kuò)增速度：延伸速度可以達(dá)到5-10sec/kb，最短半小時(shí)完成PCR。

2、突出的長片段擴(kuò)增能力：可擴(kuò)增高達(dá)10kb的長片段（包括人類基因組此類的復(fù)雜模板）。

3、良好保真性：保真度是taq的3倍以上。

4、強(qiáng)大的擴(kuò)增能力：產(chǎn)量高，對(duì)于一些有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板和GC含量高模板有良好效果。

建議PCR 體系設(shè)置

參考模板用量（50 μl反應(yīng)體系）

質(zhì)粒：0.1-10ng；細(xì)菌基因組：10-100ng；人類基因組：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。

建議PCR循環(huán)條件

注意事項(xiàng)

1.本品擴(kuò)增速度極快， 質(zhì)粒和簡(jiǎn)單基因組等簡(jiǎn)單模板可以嘗試5s/kb延伸速度并采用減少循環(huán)數(shù)以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間；長片段（大于等于3kb）或者復(fù)雜模板產(chǎn)量較低應(yīng)采用15-20s/kb延伸速度或者采用較多循環(huán)數(shù)。

2.Lab FL產(chǎn)量較低時(shí)可嘗試采用較長的延伸時(shí)間（如20s/kb）和循環(huán)數(shù)（如35個(gè)）可以提高產(chǎn)物產(chǎn)量。

3.對(duì)于GC含量很高的模板，短片段預(yù)變性和變性溫度可以提高到98 ^oC和/或適當(dāng)延長變性時(shí)間。長片段為了避免DNA損傷不應(yīng)該提高變性溫度，應(yīng)該適當(dāng)延長預(yù)變性時(shí)間到5min.，變性時(shí)間可以延長5-10s。

4.如果擴(kuò)增模板GC含量高或者模板復(fù)雜擴(kuò)增效果不佳時(shí)，可在反應(yīng)混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，按照1%梯度增加摸索best濃度。或者加入甜菜堿至終濃度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）