轉(zhuǎn)染試劑如何克服生物屏障？

更新時(shí)間：2025-07-07

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　　通過電荷中和、內(nèi)體逃逸、核定位等機(jī)制有效克服生物屏障，在基因治療、疫苗開發(fā)和基礎(chǔ)研究中具有廣泛應(yīng)用。隨著納米技術(shù)和生物材料的進(jìn)步，轉(zhuǎn)染技術(shù)將更加高效、安全，為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)和生物醫(yī)藥帶來革命性突破。

　　1.生物屏障的主要類型

　　在轉(zhuǎn)染過程中，外源核酸需要克服多重障礙才能成功進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)揮作用，主要包括：

　　(1)細(xì)胞膜屏障

　　細(xì)胞膜由磷脂雙分子層構(gòu)成，帶有負(fù)電荷，排斥帶負(fù)電的核酸分子，阻止其自由進(jìn)入細(xì)胞。

　　(2)內(nèi)體逃逸屏障

　　大多數(shù)轉(zhuǎn)染復(fù)合物通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，但核酸可能被困在內(nèi)體或溶酶體中，并被降解。

　　(3)核膜屏障

　　對(duì)于DNA轉(zhuǎn)染，外源DNA需進(jìn)入細(xì)胞核才能轉(zhuǎn)錄，但核孔復(fù)合物僅允許小分子自由擴(kuò)散，大分子DNA需依賴主動(dòng)運(yùn)輸機(jī)制。

　　(4)免疫清除屏障

　　在體內(nèi)轉(zhuǎn)染時(shí)，核酸可能被免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除，或被血清中的核酸酶降解。

　　2.試劑克服生物屏障的機(jī)制

　　轉(zhuǎn)染試劑可分為化學(xué)（如脂質(zhì)體、陽(yáng)離子聚合物）、物理方法（如電穿孔、顯微注射）和病毒載體。其中，化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑因其高效性和安全性被廣泛應(yīng)用，其克服生物屏障的機(jī)制如下：

　　(1)中和電荷，促進(jìn)細(xì)胞攝取

　　核酸帶負(fù)電，難以穿透細(xì)胞膜。陽(yáng)離子脂質(zhì)體（如Lipofectamine）或聚合物（如PEI）通過正電荷與核酸結(jié)合，形成穩(wěn)定的納米復(fù)合物，減少靜電排斥，促進(jìn)細(xì)胞膜吸附和內(nèi)吞。

　　(2)促進(jìn)內(nèi)體逃逸

　　內(nèi)體酸化環(huán)境可能導(dǎo)致核酸降解。一些轉(zhuǎn)染試劑（如PEI、DOTAP）具有“質(zhì)子海綿效應(yīng)”，緩沖內(nèi)體pH值，導(dǎo)致內(nèi)體腫脹破裂，釋放核酸到胞質(zhì)中。

　　(3)核定位信號(hào)（NLS）增強(qiáng)核轉(zhuǎn)運(yùn)

　　DNA需進(jìn)入細(xì)胞核才能表達(dá)，部分（如脂質(zhì)體-PEI復(fù)合物）可偶聯(lián)核定位信號(hào)肽，幫助DNA結(jié)合輸入蛋白，通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核。

　　(4)提高穩(wěn)定性，避免免疫清除

　　在體內(nèi)遞送時(shí)，聚乙二醇（PEG）修飾可減少血清蛋白吸附，延長(zhǎng)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的循環(huán)時(shí)間，并降低免疫原性。此外，化學(xué)修飾的核酸（如硫代磷酸酯RNA）可抵抗核酸酶降解。

　　3.應(yīng)用與優(yōu)化

　　轉(zhuǎn)染試劑的優(yōu)化使其在多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用：

　　(1)基因治療

　　如脂質(zhì)納米顆粒（LNP）用于遞送mRNA疫苗，或CRISPR-Cas9基因編輯系統(tǒng)。

　　(2)細(xì)胞與分子生物學(xué)研究

　　siRNA、shRNA轉(zhuǎn)染用于基因沉默研究，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染用于蛋白表達(dá)分析。

　　(3)藥物開發(fā)

　　高通量篩選依賴高效轉(zhuǎn)染技術(shù)，如報(bào)告基因檢測(cè)、基因功能研究。

　　(4)優(yōu)化策略

　　-靶向遞送：偶聯(lián)抗體或配體（如葉酸），提高細(xì)胞特異性。

　　-可降解材料：如可切割脂質(zhì)，降低毒性。

　　-組合遞送：如聚合物與脂質(zhì)體混合使用，平衡效率和安全性。

　　4.挑戰(zhàn)與未來展望

　　盡管它已取得顯著進(jìn)展，但仍面臨挑戰(zhàn)：

　　-細(xì)胞毒性：如PEI在高濃度時(shí)可能引起細(xì)胞死亡。

　　-體內(nèi)遞送效率低：需進(jìn)一步提高靶向性和穩(wěn)定性。

　　-免疫原性：某些脂質(zhì)或聚合物可能激活免疫反應(yīng)。

　　未來，新型材料（如仿生膜載體）、智能響應(yīng)型遞送系統(tǒng)（如pH/酶敏感載體）及AI輔助設(shè)計(jì)將推動(dòng)轉(zhuǎn)染技術(shù)的發(fā)展。

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